تشخیص فیتوپلاسماهای همراه با بیماری های جاروک بادام خفر و جاروک پایه gf-677 استهبان بر اساس ویژگی های بیولوژیکی و مولکولی

پایه gf-677 هیبریدی از بادام و هلو (prunus amygdalus x prunus persica)، دارای ریشه های مستحکم و نیز دارای پتانسیل فوق العاده ای در جهت مقابله با آفات و بیماری ها است. این پایه در سال های اخیر از اروپا وارد ایران شده و در نقاطی از استان فارس کشت گردیده تا از طریق قلمه تکثیر گردد و در اختیار تولید کنندگان نهال در سرتاسر ایران قرار داده شود. بررسی های مقدماتی نشان داده بود که فیتوپلاسمای عامل جاروک gf-677 متعلق به گروه 16srix می باشند. در پژوهش حاضر فیتوپلاسمای عامل جاروک gf-677 استهبان با فیتوپلاسمای عامل جاروک بادام خفر از نظر خصوصیات بیولوژیکی و مولکولی مقایسه شدند. عامل بیماری جاروک بادام خفر و جاروک gf-677 استهبان توسط سس و پیوند به پروانش انتقال داده شد. در پروانش های مایه زنی شده با عامل جاروک بادام خفر، گل سبزی و برگسانی ایجاد نشد اما این علائم جزء علائم بارز در پروانش های مایه زنی شده با فیتوپلاسمای عامل جاروک gf-677 استهبان بود. از بافت رگبرگ میانی پروانش های آلوده به فیتوپلاسماهای عامل بیماری جاروک بادام خفر و جاروک gf-677 استهبان dna کل استخراج گردید. در آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز(pcr) مستقیم با استفاده از جفت آغازگرهای p1/p7، p3/p7 و دو مرحله ای (nested-pcr) با استفاده از جفت آغازگر p1/p7 در دور اول و r16f2n/r16r2 در دور دوم به ترتیب قطعاتی به اندازه های تقریبی 1800، 350 و 1200 جفت باز از اپرون rna ریبوزومی تکثیر شد. علاوه بر آزمون های pcr فوق، آزمون pcr مستقیم با جفت آغازگر rpf1/rpr1 که بر اساس اپرون پروتئین ریبوزومی طراحی شده است، نیز انجام شد و قطعه مورد نظر (1245-1389 جفت باز) تکثیرشد. جستجو با برنامه بلاست پس از تعیین ترادف محصول pcr مستقیم با جفت آغاز گرهای p3/p7 و rpf1/rpr1 از هر دو نمونه، تعلق این که این دو فیتوپلاسما به گروه جاروک نخود کبوتر ((16srix را تأیید کرد. اما مقایسه چند شکلی طول قطعات برشی (rflp) مجازی محصول pcr دو مرحله ای نشان داد که جاروک بادام خفر و جاروک gf-677 استهبان بر اساس آنزیم های برشی drai، hhai، rsai و taqi با یکدیگر متفاوتند و بترتیب متعلق به زیر گروه های 16srix-c و 16srix-b می باشند. مقایسه نقوش حاصل از rflp فیزیکی محصول pcr مستقیم، با استفاده از جفت آغازگر rpf1/rpr1 بر اساس آنزیم های haeiii و drai و مقایسه نقوش حاصل از rflp فیزیکی محصول pcr مستقیم، با استفاده از جفت آغازگر p1/p7 بر اساس آنزیم های drai و mboi نشان داد که فیتوپلاسماهای عامل بیماری جاروک بادام خفر و جاروک gf-677 استهبان متفاوتند. آنالیزهای فیلوژنتیکی و میزان تشابه نوکلئوتیدی بر اساس اپرون های rnaریبوزومی و پروتئین ریبوزومی، نیز تفاوت جاروک gf-677 استهبان با جاروک بادام خفر را تأیید کرد. این آنالیزها نشان داد که فیتوپلاسمای عامل جاروک gf-677 استهبان با فیتوپلاسمای عامل جاروک بادام در لبنان و نیریز فارس (candidatus phytoplasma phoenicium-16srix-b) طبقه بندی می شود.